Көпчүлүк вирустардын геномдук тизмеги белгилүү болгон.ДНКнын кыска сегменттери болгон нуклеиндик кислота зонддору кошумча вирустук ДНК же РНК сегменттери менен гибриддештирүү үчүн иштелип чыккан.Полимераздык чынжыр реакциясы (ПЦР) вирусту аныктоонун натыйжалуу ыкмасы.Жогорку өтүмдүүлүк диагностикалык ыкмалары жакында иштелип чыккан.
A. Нуклеин кислотасын гибриддештирүү техникасы
Нуклеиндик кислотаны гибриддештирүү, анын ичинде Түштүк блоттинг (Түштүк) жана Түндүк блоттинг (Түндүк), вирус диагностикалык тармагында тез өнүгүп жаткан жаңы ыкма.Гибриддештирүү анализинин негизи комплементардык вирустук ДНК же РНК сегменттери менен гибриддештирүү үчүн иштелип чыккан ДНКнын кыска сегменттерин («зонд» деп аталат) колдонуу болуп саналат.Жылытуу же щелочтук дарылоо жолу менен кош саптуу максаттуу ДНК же РНК бир тилкеге бөлүнүп, андан кийин катуу таянычта иммобилизацияланат.Андан кийин, зонд кошулуп, максаттуу ДНК же РНК менен гибридделет.Зонд изотоп же радиоактивдүү эмес нуклид менен белгиленгендиктен, максаттуу ДНК же РНК авторадиография же биотин-авидин системасы аркылуу аныкталышы мүмкүн.Вирустук геномдордун көбү клондолуп жана секвенирленгендиктен, аларды үлгүдөгү зонд катары вируска тиешелүү ырааттуулуктарды колдонуу менен аныктоого болот.Азыркы учурда гибриддештирүү ыкмаларына төмөнкүлөр кирет: чекиттүү тактоо, клеткаларда in situ гибриддештирүү, ДНКны тазалоо (ДНК) (Түштүк блот) жана РНКны тазалоо (РНК) (Түндүк блот).
B.PCR технологиясы
Акыркы жылдарда сезгич эмес же өстүрүлбөгөн вирустарды сыноо үчүн ПТРдин негизинде нуклеиндик кислотаны in vitro күчөтүү ыкмаларынын сериясы иштелип чыккан.ПТР - бул in vitro полимераз реакциясы аркылуу белгилүү ДНК ырааттуулугун синтездей ала турган ыкма.ПТР процесси үч этаптан турган жылуулук циклин камтыйт: денатурация, күйгүзүү жана узартуу Жогорку температурада (93℃~95℃), кош саптуу ДНК эки бир ДНК тилкеге бөлүнөт;андан кийин төмөнкү температурада (37℃~60℃), эки синтезделген нуклеотиддик праймер кошумча ДНК сегменттерине кошулат;ал эми Taq ферменти үчүн ылайыктуу температурада (72℃) жаңы ДНК чынжырларынын синтези 3-учунан баштап толуктоочу ДНКны калыптар жана бир нуклеотиддерди материал катары колдонуу менен башталат.Ошентип, ар бир циклден кийин, бир ДНК чынжыр эки чынжырга күчөтүлүшү мүмкүн.Бул процессти кайталап, бир циклде синтезделген ар бир ДНК чынжырын кийинки циклде шаблон катары колдонсо болот жана ар бир циклде ДНК чынжырларынын саны эки эсеге көбөйөт, бул ПТР өндүрүшү 2n логдук ылдамдыкта күчөйт дегенди билдирет.25-30 циклден кийин, ПТР өндүрүшү электрофорез аркылуу аныкталат жана спецификалык ДНК продуктуларын UV жарыгында (254нм) байкоого болот.Өзүнүн өзгөчөлүгү, сезгичтиги жана ыңгайлуулугу үчүн ПТР HCV, HIV, CMV жана HPV сыяктуу көптөгөн вирустук инфекциялардын клиникалык диагностикасында кабыл алынган.ПТР өтө сезгич болгондуктан, ал вирустун ДНКсын fg деңгээлинде аныктай алат, жалган позитивден качуу үчүн операция өтө кылдаттык менен жүргүзүлүшү керек.Мындан тышкары, нуклеиндик кислота тестинин оң натыйжасы үлгүдө тирүү инфекциялык вирус бар дегенди билдирбейт.
ПТР техникасын кеңири колдонуу менен, ар кандай тестирлөө максатында ПТР техникасынын негизинде жаңы ыкмалар жана методдор иштелип чыкты.Мисалы, реалдуу убакытта сандык ПТР вирустук жүктү аныктай алат;in situ ПТР кыртыштарда же клеткаларда вирус инфекциясын аныктоо үчүн колдонулат;Уюшкан ПТР ПТРдин өзгөчөлүгүн жогорулата алат.Алардын ичинен реалдуу убакыт сандык ПТР тезирээк иштелип чыккан.TaqMan гидролиздик зонд, гибриддештирүү зонд жана молекулярдык маяк зонд сыяктуу көптөгөн жаңы техникалар клиникалык изилдөөдө кеңири колдонулган реалдуу убакыттагы сандык ПТР техникасына айкалыштырылган.Бейтаптардын дене суюктугундагы вирустук жүктү так аныктоодон тышкары, бул ыкманы дарыга чыдамдуу мутантты аныктоо үчүн да колдонсо болот.Ошондуктан, реалдуу убакыт сандык ПТР негизинен дарылык эффектилерди баалоодо жана дары-дармектерге сабырдуулукту көзөмөлдөөдө колдонулат.
C. Вирустук нуклеиндик кислоталарды жогорку өтүмдүү аныктоо
Жаңы пайда болгон жугуштуу ооруларды тез диагностикалоо муктаждыктарын канааттандыруу үчүн, ДНК чиптери (ДНК) сыяктуу ар кандай жогорку ылдамдыктагы аныктоо ыкмалары түзүлгөн.ДНК микросхемалары үчүн атайын зонддор синтезделет жана үлгү менен гибриддештириле турган ДНК зонд микроаррайын (ДНК) түзүү үчүн өтө жогорку тыгыздыктагы кичинекей кремний чиптерине тиркелет.Гибриддештирүү сигналы конфокалдык микроскоп же лазердик сканер аркылуу түшүрүлүп, андан ары компьютерде иштетилип, ар кандай гендерге тиешелүү чоң маалыматтар топтомун алууга болот.ДНК чиптин эки түрү бар."Синтездик чип" төмөнкүдөй: белгилүү бир олигонуклеотиддер түздөн-түз чиптерде синтезделет.Дагы бир ДНК бассейн чип болуп саналат.Клондолгон гендер же ПЦР продуктулары слайдда иреттүү түрдө басылып чыгат.ДНК чип технологиясынын артыкчылыгы - бир эле учурда көп сандагы ДНК ырааттуулугун аныктоо.Патогенди аныктоо чипинин акыркы версиясы бир эле учурда 1700дөн ашуун адамдын вирусун аныктай алат.ДНК чип технологиясы салттуу нуклеин кислотасын гибриддештирүү ыкмаларынын көйгөйлөрүн чечти жана вирустук диагностикада жана эпидемиологиялык изилдөөдө абдан кеңири колдонулат.
Билдирүү убактысы: 23-декабрь, 2020-жыл